产品货号：
HR0027
中文名称：
细胞核蛋白提取试剂盒
英文名称：
Nuclear Protein Extraction Kit
产品规格：
50T|100T
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本试剂盒适用于从各种原代或传代细胞中提取核蛋白。提取过程简单方便，可在1小时内完成。制备的核蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。
保存：蛋白提取液、磷酸酶抑制剂混合物2～8℃，有效期1年。
离心机、移液器、涡旋混匀器、振荡器、PBS、BCA蛋白定量试剂盒
相关搜索：细胞核蛋白提取试剂盒，Nuclear Protein Extraction Kit
- 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定等蛋白研究。
- 本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。
- 本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，需要除盐后再用于2D电泳。如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用其他货号的试剂盒。
- 使用方便，从细胞中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
- 将蛋白提取的时间缩短至30分钟～1小时。
- 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
- 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
- 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
| 组分 | 50T | 100T |
| 细胞核提取液A | 10mL | 20mL |
| 细胞核提取液B | 10mL | 20mL |
| 蛋白酶抑制剂混合物 | 250μL | 500μL |
| 磷酸酶抑制剂混合物 | 250μL | 500μL |
保存：蛋白提取液、磷酸酶抑制剂混合物2～8℃，有效期1年。
- 蛋白酶抑制剂短期可2～8℃储存，开盖使用后-20℃储存。
- 蛋白酶抑制剂在2～8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
离心机、移液器、涡旋混匀器、振荡器、PBS、BCA蛋白定量试剂盒
- 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
- 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
- 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
- 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
- Western实验内参可以选用Lamin A、Lamin B、TBP、Histon H3。
- 提取液制备：每200μL冷的细胞核蛋白提取液A和B中分别加入2μL蛋白酶抑制剂混合物和磷酸酶抑制剂，混匀后置冰上备用。
注：
● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
● 以下步骤中使用的蛋白提取液为此步配制好的含蛋白酶抑制剂的提取液。 - 取5～10×106个细胞，在4℃，500×g条件下离心2～3分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
注：细胞数量根据实验情况调整，每次的裂解液用量并不是一定的，请根据实际情况调整。 - 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
- 每20μL细胞压积中加入200μL冷的提取液A，高速涡旋振荡15秒，置冰上10分钟。
- 再次高速涡旋振荡5秒，然后在4℃，16000×g条件下离心5分钟。
- 弃上清。
- 在沉淀中加入200μL冷的提取液B，高速涡旋振荡15秒。
- 置冰上40分钟，每隔10分钟高速涡旋振荡15秒。
- 在4℃，16000×g条件下离心10分钟。
- 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到核蛋白。
- 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
注：
● 建议用BCA法进行蛋白定量。
● 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。
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